Жаңылыктар

Nature.com сайтына киргениңиз үчүн рахмат.Сиз колдонуп жаткан серепчинин версиясы чектелген CSS колдоосуна ээ.Мыкты тажрыйба үчүн жаңыртылган браузерди колдонууну сунуштайбыз (же Internet Explorerдеги Шайкештик режимин өчүрүү).Ал ортодо, үзгүлтүксүз колдоону камсыз кылуу үчүн биз сайтты стилдерсиз жана JavaScriptсиз көрсөтөбүз.
Эффективдүү фотосенсибилизаторлор фототерапияны кеңири жайылтуу үчүн өзгөчө маанилүү.Бирок, кадимки фотосенсибилизаторлор көбүнчө кыска толкун узундуктагы сиңирүүдөн, фотостабилдүүлүктүн жетишсиздигинен, реактивдүү кычкылтек түрлөрүнүн (ROS) аз кванттык түшүмдүүлүгүнөн жана ROSтун агрегациядан келип чыккан өчүрүлүшүнөн жапа чегишет.Бул жерде биз суу эритмесинде Ru(II)-арен органометаллдык комплекстерин өз алдынча чогултуу аркылуу ортомчулук кылган жакын инфракызыл (NIR) супрамолекулярдык фотосенсибилизатор (RuDA) жөнүндө кабарлайбыз.RuDA агрегацияланган абалда синглеттүү кычкылтекти (1O2) гана түзө алат жана синглет-триплет системасынын ортосундагы кроссовер процессинин олуттуу өсүшүнөн улам ачык агрегациядан келип чыккан 1O2 генерациясынын жүрүм-турумун көрсөтөт.808 нм лазер жарыгынын таасири астында RuDA 16,4% (FDA тарабынан бекитилген индоцианин жашыл: ΦΔ=0,2%) 1O2 кванттык түшүмдүүлүгүн жана 24,2% (коммерциялык алтын нанородо) фототермикалык жогорку эффективдүүлүгүн көрсөтөт.: 21,0%, алтын нан кабыктары: 13,0%).Мындан тышкары, жакшы биологиялык шайкештик менен RuDA-NPs артыкчылыктуу шишик сайттарында топтолушу мүмкүн, in vivo шишик көлөмүн 95,2% кыскартуу менен фотодинамикалык терапия учурунда олуттуу шишик регрессиясын жаратат.Бул агрегацияны күчөтүүчү фотодинамикалык терапия жагымдуу фотофизикалык жана фотохимиялык касиеттери бар фотосенсибилизаторлорду иштеп чыгуу стратегиясын камсыз кылат.
Кадимки терапияга салыштырмалуу, фотодинамикалык терапия (PDT) так мейкиндик-убакыт контролу, инвазивдүүлүк, дары-дармекке каршылыктын азайышы жана терс таасирлерин минималдаштыруу сыяктуу маанилүү артыкчылыктары үчүн рак оорусун жагымдуу дарылоо болуп саналат 1,2,3.Жарык нурлануу астында колдонулган фотосенсибилизаторлор апоптоз/некроз же иммундук реакцияга алып келип, жогорку реактивдүү кычкылтек түрлөрүн (ROS) түзүү үчүн активдештирилиши мүмкүн. Бирок, хлорин, порфириндер жана антрахинондор сыяктуу кадимки фотосенсибилизаторлордун көбү салыштырмалуу кыска толкундуу сиңирүүгө ээ (жыштыгы < 680 нм), ошондуктан биологиялык молекулалардын (мисалы, гемоглобин жана меланин) интенсивдүү сиңирүүсүнөн улам жарыктын начар өтүшүнө алып келет. көрүнүүчү аймак6,7. Бирок, хлорин, порфириндер жана антрахинондор сыяктуу кадимки фотосенсибилизаторлордун көбү салыштырмалуу кыска толкундуу сиңирүүгө ээ (жыштыгы < 680 нм), ошондуктан биологиялык молекулалардын (мисалы, гемоглобин жана меланин) интенсивдүү сиңирүүсүнөн улам жарыктын начар өтүшүнө алып келет. көрүнүүчү аймак6,7. Однако большинство обычных фотосенсибилизаторов, таких как хлорины, порфирины жана антрахиноны, обладают относительно коротковолновым поглощением (частота < 680 нм), бул приводит к плохому проникновению поглощением (частота < 680 нм), бул приводит к плохому проникновению света из-зобразование область, положительное общественные выполняющийся. Бирок, хлорин, порфириндер жана антрахинондор сыяктуу көбүнчө фотосенсибилизаторлор салыштырмалуу кыска толкун узундугуна ээ (<680 нм), натыйжада биологиялык молекулалардын (мисалы, гемоглобин жана меланин) көрүнгөн аймакка интенсивдүү сиңишинен улам жарыктын начар өтүшүнө алып келет6,7.然而, 大多数 传统 的, 如 二 氢 具有, 具有 卟啉 短 短 具有 具有 吸收 (频率 短 短 的), 因此 由于 对 生物 分子 (如 对 蛋白 蛋白生物) 的 强烈 吸收,导致光穿透性差。然而, 大多数 传统 的 光敏剂, 二 氢 卟酚, 卟啉 的 波长, 具有 具有 相对 较 短 短 因此 因此 由于 对 分子 (血红 对 分子) 的 ,,,,,,,吸收 吸收 吸收 吸收 吸收 吸收 HI导致光穿透性差。 Однако большинство традиционных фотосенсибилизаторов, таких как хлорины, порфирины и антрахиноны, имеют относительно коротковолновое поглощение (частота < 680 нм) из-за сильного поглощения биомолекул, ошондой эле ар кандай пайда алып келет. Бирок, хлорин, порфириндер жана антрахинондор сыяктуу салттуу фотосенсибилизаторлордун көбү гемоглобин жана меланин сыяктуу биомолекулалардын күчтүү сиңирүүсүнөн улам салыштырмалуу кыска толкун узундуктагы сиңирүүгө ээ (жыштыгы <680 нм) жарыктын начар өтүшүнө алып келет.Көрүнүүчү аймак 6.7.Ошондуктан, 700–900 нм "терапевтик терезеде" активдештирилген жакын инфракызыл (NIR) сиңирүүчү фотосенсибилизаторлор фототерапия үчүн абдан ылайыктуу.Жакынкы инфракызыл жарык биологиялык кыртыштар тарабынан эң аз сиңирилгендиктен, ал тереңирээк кирүүгө жана азыраак фотодамажга алып келиши мүмкүн8,9.
Тилекке каршы, учурдагы NIR-соргуч фотосенсибилизаторлор көбүнчө начар фотостабилдүүлүккө, синглатты кычкылтекти (1O2) түзүүчү кубаттуулукка жана агрегациядан келип чыккан 1O2 өчүрүүгө ээ, бул алардын клиникалык колдонулушун чектейт10,11.Кадимки фотосенсибилизаторлордун фотофизикалык жана фотохимиялык касиеттерин жакшыртуу үчүн көп күч-аракет жумшалса да, ушул убакка чейин NIR-соргуч фотосенсибилизаторлор бул көйгөйлөрдүн баарын чече аларын бир нече отчеттор билдирди.Мындан тышкары, бир нече фотосенсибилизаторлор 800 нмден жогору жарык менен нурланганда 1O212,13,14 эффективдүү генерациясын убада кылышты, анткени фотондун энергиясы жакынкы IR аймагында тез азаят.Трифениламин (TFA) электрон донору катары жана [1,2,5]тиадиазол-[3,4-i]дипиридо[а,с]феназин (TDP) электрондук акцептордук топ катары Донор-акцептор (DA) тибиндеги боёктордун классын боёйт. боёктордун, жакын инфракызылды сиңирүү, алар тар диапазондуктун аркасында жакын инфракызыл биобейнелөө II жана фототермиялык терапия (PTT) үчүн кеңири изилденген.Ошентип, алар сейрек PDT үчүн photosensitizers катары изилденген болсо да, DA-түрү боектор, жакын-IR дүүлүктүрүү менен PDT үчүн колдонулушу мүмкүн.
Фотосенсибилизаторлордун системалар аралык кесилишинин (ИСК) жогорку эффективдүүлүгү 1О2 түзүлүшүнө көмөктөшөрү белгилүү.ISC процессин илгерилетүүнүн жалпы стратегиясы оор атомдорду же атайын органикалык бөлүктөрдү киргизүү жолу менен фотосенсибилизаторлордун спин-орбиталык байланышын (SOC) жогорулатуу болуп саналат.Бирок, бул ыкма дагы эле кээ бир кемчиликтери жана чектөөлөр бар19,20.Жакында, супрамолекулярдык өзүн-өзү чогултуу молекулярдык деңгээлде функционалдык материалдарды жасоо үчүн ылдыйдан өйдө интеллектуалдык ыкманы камсыз кылды,21,22 фототерапияда көптөгөн артыкчылыктарга ээ: (1) өз алдынча чогултулган фотосенсибилизаторлор лента структураларын түзүү мүмкүнчүлүгүнө ээ болушу мүмкүн.Курулуш блокторунун ортосундагы орбиталардын бири-бирин кайталоосунан улам энергия деңгээли тыгызыраак бөлүштүрүлгөн электрондук структураларга окшош.Ошондуктан, төмөнкү синглет толкунданган абалы (S1) менен кошуна үчтүк толкунданган мамлекеттин (Tn) ортосундагы энергетикалык дал ISC жараяны 23, 24 үчүн пайдалуу болуп саналат, жакшыртат.(2) Supramolecular жыйын, ошондой эле ISC жараяны 25, 26 өбөлгө intramolecular кыймыл чектөө механизми (RIM) негизинде эмес нурлануу эс азайтат.(3) Супрамолекулярдык жыйын мономердин ички молекулаларын кычкылдануудан жана бузулуудан коргой алат, ошону менен фотосенсибилизатордун фотостабилдүүлүгүн бир топ жакшыртат.Жогорудагы артыкчылыктарды эске алуу менен, биз supramolecular photosensitizer системалары PDT кемчиликтерин жоюу үчүн келечектүү альтернатива боло алат деп ишенебиз.
Ru(II) негизиндеги комплекстер уникалдуу жана жагымдуу биологиялык касиеттеринен улам оорулардын диагностикасында жана терапиясында потенциалдуу колдонуу үчүн келечектүү медициналык платформа болуп саналат28,29,30,31,32,33,34.Мындан тышкары, толкунданган абалдардын көптүгү жана Ru(II) негизиндеги комплекстердин жөнгө салынуучу фотофизикалык-химиялык касиеттери Ru(II) негизиндеги фотосенсибилизаторлорду иштеп чыгуу үчүн чоң артыкчылыктарды берет35,36,37,38,39,40.Көрүнүктүү мисал катары рутений (II) полипиридил комплекси TLD-1433 болуп саналат, ал учурда булчуңдардын инвазивдүү эмес табарсык рагын (NMIBC) дарылоо үчүн фотосенсибилизатор катары II фазадагы клиникалык сыноолордон өтүп жатат41.Мындан тышкары, рутений (II) арен органометаллдык комплекстери аз уулуулугуна жана модификациясынын жеңилдигине байланыштуу ракты дарылоодо химиотерапевтик агенттер катары кеңири колдонулат42,43,44,45.Ru(II)-арендик металлорганикалык комплекстердин иондук касиеттери ДА хромофорлорунун жалпы эриткичтерде начар эригин гана жакшыртпастан, ДА хромофорлорунун чогулушун да жакшыртат.Кошумчалай кетсек, Ru(II)-арендердин органометаллдык комплекстеринин псевдооктаэдрдик жарым сэндвичтүү структурасы DA тибиндеги хромофорлордун Н-агрегациясын стериялык түрдө алдын алат, ошону менен кызылга жылган жутуу тилкелери менен J-агрегациясынын пайда болушуна көмөктөшөт.Бирок, Ru(II)-арен комплекстеринин мүнөздүү кемчиликтери, мисалы, төмөн туруктуулук жана/же начар биожеткиликтүүлүк, арен-Ru(II) комплекстеринин терапиялык эффективдүүлүгүнө жана in vivo активдүүлүгүнө таасир этиши мүмкүн.Бирок, изилдөөлөр көрсөткөндөй, бул кемчиликтерди физикалык инкапсуляция же коваленттик конъюгация жолу менен биологиялык шайкеш полимерлер менен рутений комплекстерин капсулдаштыруу аркылуу жоюуга болот.
Бул иште биз DAD хромофору менен Ru(II)-арен бөлүгүнүн ортосундагы координациялык байланыш аркылуу NIR триггери бар Ru(II)-arene (RuDA) DA-конъюгацияланган комплекстерин билдиребиз.Пайда болгон комплекстер коваленттүү эмес өз ара аракеттенүүдөн улам суудагы металлосупрамолекулярдык везикулаларга өз алдынча чогула алат.Белгилей кетчү нерсе, supramolecular жыйыны PDT үчүн абдан жагымдуу болгон ISC натыйжалуулугун бир кыйла жогорулаган полимерлештирүү менен шартталган системалар аралык кайчылаш касиеттери менен RuDA ыйгарган (сүрөт. 1A).Шишиктин топтолушун жана in vivo био шайкештигин жогорулатуу үчүн, FDA тарабынан бекитилген Pluronic F127 (PEO-PPO-PEO) RuDA47,48,49 инкапсуляциялоо үчүн колдонулган RuDA-NP нанобөлүкчөлөрүн (Figure 1B) түзүү үчүн жогорку эффективдүү PDT/ Dual- режими PTT прокси.Рак фототерапиясында (Figure 1C), RuDA-NP PDT жана PTT in vivo эффективдүүлүгүн изилдөө үчүн MDA-MB-231 шишиктери менен жылаңач чычкандарды дарылоо үчүн колдонулган.
Рак фототерапиясы үчүн мономердик жана агрегацияланган формалардагы RuDAнын фотофизикалык механизминин схемалык иллюстрациясы, NIR менен активдештирилген PDT жана PTT үчүн B RuDA-NPs жана C RuDA-NPs синтези.
TPA жана TDP функцияларынан турган RuDA кошумча 1-сүрөттө көрсөтүлгөн процедурага ылайык даярдалган (2А-сүрөт), ал эми RuDA 1H жана 13C ЯМР спектрлери, электроспрей иондоштуруунун масс-спектрометриясы жана элементардык анализи менен мүнөздөлгөн (Кошумча 2-4-сүрөттөр 2-4) ).Эң төмөнкү синглеттик өтүүнүн RuDA электрон тыгыздыгынын айырмачылык картасы зарядды өткөрүү процессин изилдөө үчүн убакытка көз каранды тыгыздыктын функционалдуу теориясы (TD-DFT) менен эсептелген.Кошумча 5-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, электрондун тыгыздыгы негизинен трифениламинден TDP акцептордук бирдигине фотокозголгондон кийин жылат, муну молекулярдык заряддын типтүү өтүшү (КТ) менен түшүндүрсө болот.
Руданын химиялык түзүлүшү В ДМФ менен суунун түрдүү катыштарындагы аралашмалардагы Руданын абсорбциялык спектрлери.C RuDA (800 нм) жана ICG (779 нм) 808 нм лазер жарыгынын 0,5 Вт см-2 убакытка салыштырмалуу нормалдаштырылган сиңирүү маанилери.D АБДАнын фотодеградациясы толкун узундугу 808 нм жана кубаттуулугу 0,5 Вт/см2 болгон лазердик нурлануунун таасири астында суунун ар кандай курамы бар DMF/H2O аралашмаларында RuDA-индукцияланган 1О2 түзүлүшү менен көрсөтүлөт.
Аннотация — УК-көрүнүүчү абсорбциялык спектроскопия ар кандай катышта ДМФ жана суунун аралашмаларындагы Руданын өз алдынча түзүлүш касиеттерин изилдөө үчүн колдонулган.Сүрөттө көрсөтүлгөндөй.2B, RuDA 729 нм максималдуу жутуу тилкеси менен DMFте 600дөн 900 нмге чейинки жутулуу тилкелерин көрсөтөт.Суунун көлөмүн көбөйтүү Руданы сиңирүү максимумунун акырындык менен 800 нмге чейин кызыл жылышына алып келди, бул чогултулган системада Руданын J-агрегациясын көрсөтөт.РуДАнын ар кандай эриткичтердеги фотолюминесценция спектрлери кошумча 6-сүрөттө көрсөтүлгөн. RuDA максималдуу нурлануу толкун узундугу менен типтүү NIR-II люминесценцияны көрсөтөт.CH2Cl2 жана CH3OHде 1050 нм.РуДАнын чоң Стокс жылышуусу (болжол менен 300 нм) дүүлүккөн абалдын геометриясынын олуттуу өзгөрүшүн жана энергиясы аз дүүлүккөн абалдардын пайда болушун көрсөтөт.CH2Cl2 жана CH3OHдагы Руданын люминесценциялык кванттык түшүмдүүлүгү тиешелүүлүгүнө жараша 3,3 жана 0,6% деп аныкталган.Бирок, метанол менен суунун аралашмасында (5/95, к/к) эмиссиянын бир аз кызыл жылышы жана кванттык түшүмдүн азайышы (0,22%) байкалган, бул Руданын өз алдынча жыйналышына байланыштуу болушу мүмкүн. .
Руданын өзүн-өзү чогултуу процессин элестетүү үчүн биз суюктук атомдук күч микроскопиясын (AFM) колдондук, ал сууну кошкондон кийин метанол эритмесиндеги кендин морфологиялык өзгөрүшүн көрүүгө болот.Суунун курамы 80% дан төмөн болгондо, так агрегация байкалган эмес (Кошумча 7-сүрөт).Бирок суунун мындан ары 90–95%ке чейин көбөйүшү менен майда нанобөлүкчөлөр пайда болгон, бул Руданын өзүнөн өзү курашуусун көрсөткөн.Мындан тышкары, 808 нм толкун узундугундагы лазердик нурлануу РуДАнын суудагы сиңирүү интенсивдүүлүгүнө таасирин тийгизген эмес. чечим (сүрөт 2C жана кошумча сүрөт 8).Ал эми, индоцианин жашылынын (контроль катары ICG) сиңирүү деңгээли 779 нмге тез төмөндөп, RuDAнын эң сонун фотостабилдүүлүгүн көрсөтөт.Мындан тышкары, PBS (рН = 5,4, 7,4 жана 9,0), 10% FBS жана DMEM (жогорку глюкоза) RuDA-NPs туруктуулугу ар кандай учурда UV көрүнгөн абсорбциялык спектроскопия менен изилденген.Кошумча 9-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, RuDA-NP абсорбция тилкелериндеги бир аз өзгөрүүлөр PBSте pH 7.4/9.0, FBS жана DMEMде байкалды, бул RuDA-NPнин эң сонун туруктуулугун көрсөтөт.Бирок кислоталуу чөйрөдө (рН = 5,4) Руданын гидролизи табылган.Биз ошондой эле жогорку натыйжалуу суюк хроматография (HPLC) ыкмаларын колдонуу менен RuDA жана RuDA-NP туруктуулугун баалады.Кошумча 10-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, RuDA метанол менен суунун аралашмасында (50/50, в/в) биринчи саатта туруктуу болгон, ал эми гидролиз 4 сааттан кийин байкалган.Бирок, RuDA NPs үчүн кенен ойуу-дөңсөк чоку гана байкалган.Ошондуктан, гел өткөрүү хроматография (GPC) PBS (рН = 7,4) менен RuDA NPs туруктуулугун баалоо үчүн колдонулган.Кошумча 11-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, сыналган шарттарда 8 саат инкубациялоодон кийин, NP RuDAнын чокусунун бийиктиги, чокусунун туурасы жана чокусунун аянты олуттуу өзгөргөн жок, бул NP RuDAнын эң сонун туруктуулугун көрсөтүп турат.Мындан тышкары, TEM сүрөттөрү RuDA-NP нанобөлүкчөлөрүнүн морфологиясы суюлтулган PBS буферинде 24 сааттан кийин дээрлик өзгөрүүсүз калганын көрсөттү (рН = 7.4, Кошумча 12-сүрөт).
Өзүн-өзү монтаждоо Рудага ар кандай функционалдык жана химиялык мүнөздөмөлөрдү бере алгандыктан, биз метанол-суу аралашмаларында 9,10-антрацендиилбис(метилен)дималон кислотасынын (ABDA, индикатор 1O2) чыгышын байкадык.Суунун курамы ар түрдүү болгон руда50.2D жана кошумча 13-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, суунун курамы 20% дан төмөн болгондо ADAнын деградациясы байкалган эмес.Нымдуулуктун 40% га чейин көбөйүшү менен, ADA деградациясы орун алган, муну ADA флуоресценциясынын интенсивдүүлүгүнүн төмөндөшү тастыктайт.Ошондой эле суунун жогорку мазмуну тезирээк деградацияга алып келери байкалган, бул RuDAнын өзүн-өзү монтаждоосу ADA деградациясы үчүн зарыл жана пайдалуу экенин көрсөтүп турат.Бул кубулуш заманбап ACQ (агрегация-индукцияланган өчүрүү) хромофорларынан абдан айырмаланат.Толкун узундугу 808 нм болгон лазер менен нурланганда 98% H2O/2% DMF аралашмасында 1O2 RuDAнын кванттык чыгышы 16,4% түзөт, бул ICGден 82 эсе жогору (ΦΔ = 0,2%)51, топтоо абалында 1О2 РуДАнын көрүнүктүү генерациялык эффективдүүлүгүн көрсөтүүдө.
Электрон спиндери 2,2,6,6-тетраметил-4-пиперидинон (TEMP) жана 5,5-диметил-1-пирролин N-оксиди (DMPO) спиндик капкандар катары пайдаланылган. Резонанстык спектроскопия (ESR) пайда болгон түрлөрдү аныктоо үчүн колдонулган. AFK.RuDA тарабынан.Кошумча 14-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, 0 жана 4 мүнөттүн ортосундагы нурлануу убагында 1O2 түзүлөөрү тастыкталды.Мындан тышкары, RuDA нурлануунун астында DMPO менен инкубацияланганда 1:2:2:1 DMPO-OH· кошулмасынын типтүү төрт саптуу EPR сигналы аныкталган, бул гидроксил радикалдарынын (OH·) пайда болушун көрсөткөн.Жалпысынан, жогорудагы жыйынтыктар RuDAнын ROS өндүрүшүн кош типтеги I/II фотосенсибилизациялоо процесси аркылуу стимулдаштыруу мүмкүнчүлүгүн көрсөтүп турат.
РуДАнын мономердик жана агрегацияланган формадагы электрондук касиеттерин жакшыраак түшүнүү үчүн DFT методу менен мономердик жана димердик формадагы РуДАнын чек ара молекулалык орбиталдары эсептелген.Сүрөттө көрсөтүлгөндөй.3A, мономердик RuDAнын эң жогорку ээлеген молекулярдык орбитасы (HOMO) лиганд омурткасы боюнча делокализацияланган жана эң төмөнкү бош молекулярдык орбитал (LUMO) TDP акцептордук бирдигинде борборлоштурулган.Тескерисинче, димердик HOMOдагы электрон тыгыздыгы бир RuDA молекуласынын лигандында топтолгон, ал эми LUMOдагы электрон тыгыздыгы негизинен башка RuDA молекуласынын акцептордук бирдигинде топтолгон, бул RuDA димерде экенин көрсөтүп турат.КТ өзгөчөлүктөрү.
A Руданын HOMO жана LUMO мономердик жана димердик формаларда эсептелет.B Руданын мономердеги жана димердеги сингл жана үчтүк энергетикалык деңгээли.C RuDAнын болжолдуу деңгээли жана мүмкүн болгон ISC каналдары мономердик C жана димердик D. Жебелер мүмкүн болгон ISC каналдарын көрсөтөт.
TD-DFT методу менен эсептелген Multiwfn 3.852.53 программалык камсыздоонун жардамы менен RuDAнын мономердик жана димердик формалардагы аз энергиялуу синглеттик дүүлүктүрүлгөн абалындагы электрондордун жана тешиктердин бөлүштүрүлүшү талданган.Кошумча этикеткада көрсөтүлгөндөй.1-2-сүрөттөрдө көрсөтүлгөндөй, мономердик RDA тешиктери бул синглет толкунданган абалда көбүнчө лиганд омурткасы боюнча делокализацияланат, ал эми электрондор негизинен TDP тобунда жайгашып, КТнын молекула ичиндеги мүнөздөмөлөрүн көрсөтөт.Кошумчалай кетсек, бул синглеттик дүүлүктүрүлгөн абалдар үчүн тешиктер менен электрондордун ортосунда аздыр-көптүр дал келүү бар, бул бул синглеттик дүүлүктүрүлгөн абалдар жергиликтүү дүүлүктүрүүдөн (LE) кандайдыр бир салым кошот деп болжолдойт.Димерлер үчүн, молекула ичиндеги CT жана LE өзгөчөлүктөрүнөн тышкары, молекулалар аралык КТ өзгөчөлүктөрүнүн белгилүү бир бөлүгү тиешелүү мамлекеттерде байкалган, өзгөчө S3, S4, S7 жана S8, молекулалар аралык КТ анализинин негизинде, КТ молекулалар аралык өтүүлөрү негизги болуп саналат. (Кошумча таблица).3).
Эксперименттик натыйжаларды жакшыраак түшүнүү үчүн, биз мономерлер менен димерлердин ортосундагы айырмачылыктарды изилдөө үчүн RuDA толкунданган абалынын касиеттерин дагы изилдедик (Кошумча таблица 4-5).3В-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, димердин синглет жана триплет толкунданган абалдарынын энергетикалык деңгээли мономердикине караганда алда канча тыгызыраак, бул S1 жана Tn ортосундагы энергия ажырымын азайтууга жардам берет. Бул ISC өтүү S1 жана Tn54 ортосундагы кичинекей энергия ажырымында (ΔES1-Tn < 0,3 eV) ичинде ишке ашырылышы мүмкүн деп билдирди. Бул ISC өтүү S1 жана Tn54 ортосундагы кичинекей энергетикалык боштук (ΔES1-Tn < 0,3 eV) ичинде ишке ашырылышы мүмкүн деп билдирди. Сообщалось, что переходы ISC мүмкүн ишке ашырылышы мүмкүн пределах небольшой энергетикалык щели (ΔES1-Tn <0,3 эВ) ортосунда S1 жана Tn54. Бул ISC өтүү S1 жана Tn54 ортосундагы кичинекей энергетикалык боштук (ΔES1-Tn <0,3 eV) ичинде ишке ашырылышы мүмкүн деп билдирди.据报道，ISC 跃迁可以在S1 和Tn54 之间的小能隙（ΔES1-Tn < 0,3 eV）内实现。据报道，ISC 跃迁可以在S1 和Tn54 之间的小能隙（ΔES1-Tn < 0,3 eV）内实现。 Сообщалось, андан кийин ISC S1 жана Tn54 ортосунда эч кандай энергияны (ΔES1-Tn < 0,3 эВ) ишке ашыра алат. Бул ISC өтүү S1 жана Tn54 ортосундагы кичинекей энергетикалык боштук (ΔES1-Tn <0,3 eV) ичинде ишке ашырылышы мүмкүн деп билдирди.Кошумчалай кетсек, нөл эмес SOC интегралын камсыз кылуу үчүн ээлеген же бош эмес бир гана орбитал байланышкан синглеттик жана триплеттик абалдар боюнча айырмаланышы керек.Ошентип, дүүлүктүрүүчү энергиянын жана орбиталык өтүүнүн анализинин негизинде ISC өтүүнүн бардык мүмкүн болгон каналдары сүрөттө көрсөтүлгөн.3C,D.Белгилей кетсек, мономерде бир гана ISC каналы бар, ал эми димердик формада ISC өтүүсүн күчөтө турган төрт ISC каналы бар.Ошондуктан, RuDA молекулалары канчалык көп топтолсо, ISC каналдары ошончолук жеткиликтүү болот деп болжолдоо жөндүү.Ошондуктан, RuDA агрегаттары синглет жана триплет абалда эки тилкелүү электрондук структураларды түзө алат, бул S1 жана жеткиликтүү Tn ортосундагы энергия ажырымын азайтат, ошону менен 1O2 генерациясын жеңилдетүү үчүн ISCтин эффективдүүлүгүн жогорулатат.
Негизги механизмди андан ары түшүндүрүү үчүн, биз RuDAдагы эки этил тобун эки трифениламин фенил тобу менен алмаштыруу аркылуу арен-Ru(II) комплексинин (RuET) эталондук кошулмасын синтездедик (сүр. 4А, толук мүнөздөмө үчүн ESI, 15-тиркемени караңыз). -21 ) Донордон (диэтиламинден) акцепторго (TDF) чейин RuET RuDA сыяктуу эле молекула ичиндеги КТ мүнөздөмөсүнө ээ.Күтүлгөндөй, RuETтин DMFдеги жутуу спектри 600–1100 нм аймактагы жакын инфракызыл аймакта күчтүү жутулушу менен аз энергия зарядын өткөрүү тилкесин көрсөттү (сүрөт 4B).Мындан тышкары, RuET агрегациясы суунун көлөмүнүн көбөйүшү менен да байкалды, бул абсорбция максимумунун кызылга жылышында чагылдырылды, бул суюк AFM сүрөтү менен дагы тастыкталды (Кошумча 22-сүрөт).Натыйжалар RuDA сыяктуу эле, интрамолекулярдык абалдарды түзө аларын жана топтолгон структураларга өзүн өзү чогулта аларын көрсөтүп турат.
РуЭТтин химиялык түзүлүшү.B ДМФ менен суунун ар кандай катыштарындагы аралашмалардагы РуЭТтин абсорбциялык спектрлери.RuDA жана RuET үчүн C EIS Nyquist участоктору.Толкун узундугу 808 нм болгон лазердик нурлануунун таасири астында RuDA жана RuETтин D фототоктук жооптору.
RuET катышуусунда АБДАнын фотодеградациясы толкун узундугу 808 нм болгон лазер менен нурлануу жолу менен бааланган.Таң калыштуусу, ар кандай суу фракцияларында ADAнын деградациясы байкалган эмес (Кошумча 23-сүрөт).Мүмкүн болгон себеп RuET эффективдүү тилкелүү электрондук түзүлүштү түзө албайт, анткени этил чынжыр молекулалар аралык заряддын эффективдүү өтүшүнө өбөлгө түзбөйт.Ошондуктан RuDA менен RuETтин фотоэлектрохимиялык касиеттерин салыштыруу үчүн электрохимиялык импеданс спектроскопиясы (ЭИС) жана өтмө фототок өлчөөлөрү жүргүзүлгөн.Nyquist сюжетине ылайык (Figure 4C), RuDA RuETге караганда бир топ кичине радиусту көрсөтөт, бул RuDA56 молекулалар аралык электрондорду ылдамыраак ташуу жана жакшы өткөрүмдүүлүккө ээ экенин билдирет.Кошумчалай кетсек, RuDAнын фототоктун тыгыздыгы RuETге караганда бир топ жогору (4D-сүрөт), RuDA57 зарядын өткөрүүнүн жакшыраак эффективдүүлүгүн тастыктайт.Ошентип, Рудадагы трифениламиндин фенил тобу молекулалар аралык заряд өткөрүүнү камсыз кылууда жана тилкелүү электрондук түзүлүштүн пайда болушунда маанилүү роль ойнойт.
Шишиктин топтолушун жана in vivo био шайкештигин жогорулатуу үчүн биз RuDAны F127 менен капсулдадык.RuDA-NPs орточо гидродинамикалык диаметри 123,1 нм тар бөлүштүрүү менен аныкталды (PDI = 0,089) динамикалык жарык чачыратуу (DLS) ыкмасын (Figure 5A), бул өткөргүчтүгүн жана кармап жогорулатуу менен шишик топтоо көмөк.EPR) таасири.TEM сүрөттөрү Руда NPs орточо диаметри 86 нм болгон бирдиктүү сфералык формага ээ экенин көрсөттү.Белгилей кетчү нерсе, RuDA-NPs сиңирүү максимуму 800 нмде пайда болгон (Кошумча 24-сүрөт), бул RuDA-NPs өзүн-өзү чогултуучу RuDAлардын функцияларын жана касиеттерин сактап кала аларын көрсөтүп турат.NP Рудасы үчүн эсептелген ROS кванттык кирешеси 15,9% түзөт, бул Руда менен салыштырууга болот.РУДА НПнын фототермикалык касиеттери инфракызыл камеранын жардамы менен толкун узундугу 808 нм болгон лазердик нурлануунун таасири астында изилденген.Сүрөттө көрсөтүлгөндөй.5B,C, башкаруу тобу (PBS гана) температуранын бир аз жогорулашына дуушар болгон, ал эми RuDA-NPs эритмесинин температурасы температуранын (ΔT) 15,5, 26,1 жана 43,0 ° Cге чейин жогорулашы менен тездик менен жогорулаган.Жогорку концентрациялар тиешелүүлүгүнө жараша 25, 50 жана 100 μM болгон, бул RuDA NPs күчтүү фототермикалык эффектин көрсөтөт.Мындан тышкары, жылытуу/муздатуу циклинин өлчөөлөрү RuDA-NPдин фототермикалык туруктуулугун баалоо жана ICG менен салыштыруу үчүн алынган.Руда АЭСинин температурасы беш жылытуу/муздатуу циклинен кийин төмөндөгөн жок (5D-сүрөт), бул Руда АЭСинин эң сонун фототермикалык туруктуулугун көрсөтөт.Ал эми, ICG ошол эле шарттарда фототермикалык температура платосунун көрүнөө жоголуп кетишинен көрүнүп тургандай, төмөнкү фототермикалык туруктуулукту көрсөтөт.Мурунку методго58 ылайык, RuDA-NPдин фототермикалык конверсия эффективдүүлүгү (PCE) 24,2% деп эсептелген, бул алтын нанородуктары (21,0%) жана алтын наношолоктары (13,0%)59 сыяктуу учурдагы фототермикалык материалдардан жогору.Ошентип, NP Ore сонун фототермикалык касиеттерин көрсөтүп, аларды келечектүү PTT агенттери кылат.
RuDA NPтеринин DLS жана TEM сүрөттөрүн талдоо (киргизүү).В 808 нм (0,5 Вт см-2) толкун узундугундагы лазердик нурланууга дуушар болгон РуДА НПнын ар кандай концентрациясындагы термикалык сүрөттөр.C Сандык маалыматтар болуп саналган руда АЭСинин ар кандай концентрациясынын фототермикалык конверсиясынын ийри сызыктары.B. D 5 жылытуу-муздатуу цикли боюнча RUDA NP жана ICG температурасынын жогорулашы.
MDA-MB-231 адамдын эмчек рагы клеткаларына каршы RuDA NPs Photocytotoxicity in vitro бааланган.Сүрөттө көрсөтүлгөндөй.6A, B, RuDA-NPs жана RuDA нурлануу жок болгон учурда анча маанилүү эмес цитотоксиктүүлүгүн көрсөттү, бул RuDA-NPs жана RuDAнын караңгы уулуулугунун төмөндүгүн билдирет.Бирок, 808 нм толкун узундугунда лазердик нурлануунун таасиринен кийин, RuDA жана RuDA NPs тиешелүүлүгүнө жараша 5,4 жана 9,4 μM болгон IC50 маанилери (жарым-максималдуу ингибитор концентрациясы) менен MDA-MB-231 рак клеткаларына каршы күчтүү фотоцитотоксиктүүлүгүн көрсөтүштү. RuDA-NP жана RuDA рактын фототерапиясы үчүн потенциалга ээ.Кошумчалай кетсек, RuDA-NP жана RuDAнын фотоцитотоксиктиги ROSтун жарыктан келип чыккан цитотоксиктүүлүгүндөгү ролун түшүндүрүү үчүн витамин С (Vc), ROS тазалагычтын катышуусунда дагы изилденген.Албетте, клетканын жашоо жөндөмдүүлүгү Vc кошулгандан кийин жогорулаган жана RuDA жана RuDA NPs IC50 маанилери тиешелүүлүгүнө жараша 25,7 жана 40,0 μM болгон, бул RuDA жана RuDA NPs фотоцитотоксиндигинде ROS маанилүү ролун далилдейт.Кальцин AM (тирүү клеткалар үчүн жашыл флуоресценция) жана пропидиум йодид (PI, өлгөн клеткалар үчүн кызыл флуоресценция) менен тирүү/өлүк клеткаларды боёп MDA-MB-231 рак клеткаларында RuDA-NPs жана RuDAнын жарыктан келип чыккан цитотоксиктиги.клеткалар тарабынан тастыкталган) флуоресценттүү зонддор катары.6C-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, RuDA-NP же RuDA менен дарыланган клеткалар нурланбастан жашоого жөндөмдүү болгон, муну интенсивдүү жашыл флуоресценция тастыктайт.Тескерисинче, лазердик нурлануу учурунда бир гана кызыл флуоресценция байкалган, бул RuDA же RuDA NPs эффективдүү фотоцитотоксиктигин тастыктайт.Белгилей кетчү нерсе, Vc кошулганда жашыл флуоресценция пайда болгон, бул RuDA жана RuDA NPтеринин фотоцитотоксиктүүлүгүнүн бузулушун көрсөтүп турат.Бул натыйжалар in vitro photocytotoxicity анализдер менен шайкеш келет.
MDA-MB-231 клеткаларындагы A RuDA- жана B RuDA-NP клеткаларынын дозага жараша жашоо жөндөмдүүлүгү Vc (0,5 мМ) бар же жок болгон учурда.Ката тилкелери, орточо ± стандарттык четтөө (n = 3). Жупташтырылбаган, эки тараптуу t тесттери *p <0.05, **p <0.01 жана ***p <0.001. Жупташтырылбаган, эки тараптуу t тесттери *p <0.05, **p <0.01 жана ***p <0.001. Непарные двусторонние t-критерии *p <0,05, **p <0,01 и ***p <0,001. Жупташкан эки куйруктуу t-тесттер *p<0.05, **p<0.01 жана ***p<0.001.未配对的双边t 检验*p <0,05、**p <0,01 和***p <0,001。未配对的双边t 检验*p <0,05、**p <0,01 和***p <0,001。 Непарные двусторонние t-тесты *p <0,05, **p <0,01 и ***p <0,001. Жупташкан эки куйруктуу t-тесттер *p<0.05, **p<0.01 жана ***p<0.001.C Флуоресценттик зонддор катары кальцин AM жана пропидий йодидди колдонуу менен тирүү/өлүк клеткаларды боёо анализи.Масштаб тилкеси: 30 мкм.Ар бир топтун үч биологиялык кайталоонун репрезентативдик сүрөттөрү көрсөтүлгөн.D ар кандай дарылоо шарттарында MDA-MB-231 клеткаларында ROS өндүрүшүнүн конфокалдык флуоресценттик сүрөттөрү.Жашыл DCF флуоресценция ROS бар экенин көрсөтүп турат.0,5 Вт/см2 кубаттуулуктагы толкун узундугу 808 нм лазер менен 10 мүнөт (300 Дж/см2) нурлантуу.Масштаб тилкеси: 30 мкм.Ар бир топтун үч биологиялык кайталоонун репрезентативдик сүрөттөрү көрсөтүлгөн.E Flow цитометриясы RuDA-NPs (50 μM) же RuDA (50 µM) дарылоо анализи 808 нм лазер менен (0,5 Вт см-2) 10 мүнөткө Vc (0,5 mM) бар жана жок болгон учурда.Ар бир топтун үч биологиялык кайталоонун репрезентативдик сүрөттөрү көрсөтүлгөн.F Nrf-2, HSP70 жана MDA-MB-231 клеткаларынын HO-1 RuDA-NPs (50 μM) менен 808 нм лазер нурлануусу менен же ансыз (0,5 Вт см-2, 10 мин, 300 Дж см-2) , клеткалар 2).Ар бир топтон эки биологиялык кайталоонун репрезентативдик сүрөттөрү көрсөтүлгөн.
MDA-MB-231 клеткаларында клетка ичиндеги ROS өндүрүшү 2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) боёо ыкмасын колдонуу менен изилденген.Сүрөттө көрсөтүлгөндөй.6D, RuDA-NPs же RuDA менен дарыланган клеткалар 808 нм лазер менен нурланганда ачык жашыл флуоресценцияны көрсөттү, бул RuDA-NPs жана RuDA ROS түзүүгө эффективдүү жөндөмгө ээ экенин көрсөтүп турат.Тескерисинче, жарык жок болгон учурда же Vc болгон учурда, ROS бир аз пайда болгонун көрсөткөн клеткалардын алсыз флуоресценттүү сигналы гана байкалган.RuDA-NP клеткаларындагы жана RuDA менен дарыланган MDA-MB-231 клеткаларындагы клетка ичиндеги ROS деңгээли андан ары агым цитометриясы менен аныкталган.Кошумча 25-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, RuDA-NPs жана RuDA тарабынан 808 нм лазердик нурлануунун астында түзүлгөн орточо флуоресценция интенсивдүүлүгү (MFI) контролдук топко салыштырмалуу тиешелүүлүгүнө жараша болжол менен 5,1 жана 4,8 эсеге көбөйдү, бул алардын эң сонун түзүлүшү AFK экендигин тастыктады.кубаттуулугу.Бирок, RuDA менен дарыланган RuDA-NP же MDA-MB-231 клеткаларындагы клетка ичиндеги ROS деңгээли лазердик нурлануусуз же Vc болгон учурда, конфокалдык флуоресценциянын анализинин натыйжаларына окшош болгон контролдор менен гана салыштырууга болот.
Митохондриялар Ru(II)-арен комплекстеринин негизги максаты экени далилденген60.Ошондуктан, RuDA жана RuDA-NPs субклеткалык локалдаштыруу изилденген.Кошумча 26-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, RuDA жана RuDA-NP митохондрияда эң көп топтолуу менен окшош уюлдук бөлүштүрүү профилдерин көрсөтөт (тиешелүүлүгүнө жараша 62,5 ± 4,3 жана 60,4 ± 3,6 нг/мг протеин).Бирок Руданын жана NP Рудасынын ядролук фракцияларында аз гана өлчөмдө Ru табылган (тиешелүүлүгүнө жараша 3,5 жана 2,1%).Калган клетка фракциясы калдык рутенийди камтыган: RuDA үчүн 31,7% (30,6 ± 3,4 нг/мг протеин) жана RuDA-NPs үчүн 42,9% (47,2 ± 4,5 нг/мг протеин).Жалпысынан алганда, Руда жана NP Руда негизинен митохондрияда топтолот.Митохондриялык дисфункцияны баалоо үчүн, биз JC-1 жана MitoSOX Кызыл боёосу менен митохондриялык мембрананын потенциалын жана супероксидди өндүрүү мүмкүнчүлүгүн баалоо үчүн колдондук.Кошумча 27-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, 808 нм лазердик нурлануунун астында RuDA жана RuDA-NPs менен иштетилген клеткаларда интенсивдүү жашыл (JC-1) жана кызыл (MitoSOX Red) флуоресценция байкалды, бул RuDA жана RuDA-NPs тең флуоресценттүүлүгү жогору экенин көрсөтүп турат. Ал эффективдүү митохондриялык мембрананын деполяризациясын жана супероксидди өндүрүүнү шарттай алат.Мындан тышкары, клетка өлүмүнүн механизми аннексин V-FITC / пропидий йодидинин (PI) агымдык цитометрияга негизделген анализин колдонуу менен аныкталган.6E-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, 808 нм лазер менен нурланганда, RuDA жана RuDA-NP PBS же PBS плюс лазерге салыштырмалуу MDA-MB-231 клеткаларында эрте апоптоздун ылдамдыгын (төмөнкү оң квадрант) бир кыйла жогорулатты.иштетилген клеткалар.Бирок, Vc кошулганда, RuDA жана RuDA-NP апоптозунун деңгээли 50,9% жана 52,0% дан 15,8% жана 17,8% га чейин кыйла төмөндөдү, бул ROSтун RuDA жана RuDA-NP фотоцитотоксиндигинде маанилүү ролун тастыктайт..Мындан тышкары, сыналган бардык топтордо (жогорку сол квадрантта) бир аз некротикалык клеткалар байкалды, бул апоптоз RuDA жана RuDA-NPs тарабынан индукцияланган клетка өлүмүнүн басымдуу түрү болушу мүмкүн дегенди билдирет.
Кычкылдануу стрессинин бузулушу апоптоздун негизги аныктоочусу болгондуктан, антиоксиданттык системанын негизги жөнгө салуучусу эритроид 2, фактор 2 (Nrf2) 62 менен байланышкан ядролук фактор RuDA-NPs менен мамиле кылган MDA-MB-231де изилденген.Нурлануу менен индукцияланган RuDA NPтеринин аракетинин механизми.Ошол эле учурда, протеин геме оксигеназа 1 (HO-1) ылдый экспрессия да аныкталган.6F-сүрөттө жана 29-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, RuDA-NP ортомчу фототерапия PBS тобуна салыштырмалуу Nrf2 жана HO-1 экспрессия деңгээлин жогорулатты, бул RuDA-NPs кычкылдануучу стресс сигнал берүү жолдорун стимулдаштырышы мүмкүн экенин көрсөтүп турат.Мындан тышкары, RuDA-NPs63 фототермикалык эффектин изилдөө үчүн Hsp70 жылуулук шок протеининин экспрессиясы да бааланган.Бул RuDA-NPs + 808 нм лазер нурлануу менен мамиле клеткалар гипертермия үчүн клеткалык жооп чагылдырган, башка эки топко салыштырмалуу Hsp70 көбөйгөн экспрессиясын көрсөттү айкын көрүнүп турат.
Кереметтүү in vitro натыйжалары MDA-MB-231 шишиктери бар жылаңач чычкандарда RuDA-NPдин in vivo иштешин изилдөөгө түрткү берди.RuDA NPs кыртыш таралышы боор, жүрөк, көк боор, бөйрөк, өпкө жана шишиктердин рутений мазмунун аныктоо менен изилденген.Сүрөттө көрсөтүлгөндөй.7A, нормалдуу органдарда Руда NPs максималдуу мазмуну биринчи байкоо убагында (4 саат) пайда болгон, ал эми максималдуу мазмуну, балким, Руда NPs улам инъекциядан кийин 8 сааттан кийин шишик кыртыштарында аныкталган.LFтин EPR эффектиси.Бөлүштүрүүнүн натыйжалары боюнча NP рудасы менен тазалоонун оптималдуу узактыгы 8 сааттан кийин кабыл алынган.RuDA-NPs шишик жерлеринде топтоо процессин көрсөтүү үчүн RuDA-NPтердин фотоакустикалык (ПА) касиеттери инъекциядан кийин ар кандай убакыттарда RuDA-NPтердин PA сигналдарын жазуу аркылуу көзөмөлдөнгөн.Биринчиден, RuDA-NPтин PA сигналы in vivo РуДА-НПнын intratumoral инъекциясынан кийин шишик сайтынын PA сүрөттөрүн жазуу менен бааланган.Кошумча 30-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, RuDA-NPs күчтүү PA сигналын көрсөттү жана RuDA-NP концентрациясы менен PA сигналынын интенсивдүүлүгүнүн ортосунда оң корреляция бар (Кошумча сүрөт 30A).Андан кийин, шишик сайттардын in vivo PA сүрөттөрү сайынуу кийин ар кандай убакыт пункттарында RuDA жана RuDA-NP тамырга сайылгандан кийин жазылган.Figure 7B көрсөтүлгөндөй, шишик сайттан RuDA-NPs PA сигнал акырындык менен көбөйүп, ICP-MS талдоо менен аныкталган кыртыш бөлүштүрүү натыйжалары менен шайкеш 8 саат пост-инъекция боюнча плато жеткен.RuDAга карата (Кошумча фиг. 30B) максималдуу PA сигнал интенсивдүүлүгү инъекциядан кийин 4 сааттан кийин пайда болуп, RuDA шишикке кирүү ылдамдыгын көрсөтөт.Мындан тышкары, ICP-MS колдонуу менен заарада жана заңда рутенийдин өлчөмүн аныктоо менен RuDA жана RuDA-NPs бөлүп чыгаруу жүрүм-туруму изилденген.RuDA (Кошумча 31-сүрөт) жана RuDA-NPs (7С-сүрөт) жоюунун негизги жолу заң аркылуу, ал эми RuDA жана RuDA-NPs эффективдүү тазаланышы 8 күндүк изилдөө мезгилинде байкалган, бул RuDA жана RuDA-NPs узак мөөнөттүү уулуулугу жок организмден эффективдүү чыгарыла алат.
A. Чычкан кыртыштарында RuDA-NP Ex vivo бөлүштүрүү Ru мазмуну (ткандын граммына Ru (ID) башкарылуучу дозасынын пайызы) сайынуу кийин ар кандай убакта аныкталган.Берилиштер орточо ± стандарттык четтөө (n = 3). Жупташтырылбаган, эки тараптуу t тесттери *p <0.05, **p <0.01 жана ***p <0.001. Жупташтырылбаган, эки тараптуу t тесттери *p <0.05, **p <0.01 жана ***p <0.001. Непарные двусторонние t-критерии *p <0,05, **p <0,01 и ***p <0,001. Жупташкан эки куйруктуу t-тесттер *p<0.05, **p<0.01 жана ***p<0.001.未配对的双边t 检验*p <0,05、**p <0,01 和***p <0,001。未配对的双边t 检验*p <0,05、**p <0,01 和***p <0,001。 Непарные двусторонние t-тесты *p <0,05, **p <0,01 и ***p <0,001. Жупташкан эки куйруктуу t-тесттер *p<0.05, **p<0.01 жана ***p<0.001.RuDA-NPs (10 μмоль кг-1) ар кандай убакыт чекиттеринде тамырга киргизилгенден кийин 808 нм дүүлүгүүдө in vivo шишик жерлеринин B PA сүрөттөрү.RuDA NPs (10 мкмоль кг-1) тамырга киргизилгенден кийин, C Ru ар кандай убакыт аралыгы менен сийдик жана заң менен чычкандардан бөлүнүп чыккан.Берилиштер орточо ± стандарттык четтөө (n = 3).
RuDA-NP жылытуу жөндөмдүүлүгү in vivo салыштыруу үчүн MDA-MB-231 жана RuDA шишиктери менен жылаңач чычкандарда изилденген.Сүрөттө көрсөтүлгөндөй.8A жана кошумча 32-сүрөт, контролдук (туздуу) тобу 10 мүнөт үзгүлтүксүз таасир этүүдөн кийин температуранын азыраак өзгөрүшүн (ΔT ≈ 3 °C) көрсөттү.Бирок, RuDA-NPs жана RuDA температурасы, тиешелүүлүгүнө жараша, 55,2 жана 49,9 °C максималдуу температура менен тездик менен өсүп, in vivo рак терапиясы үчүн жетиштүү гипертермияны камсыз кылуу.RuDA NPs үчүн (ΔT ≈ 24°C) RuDAга (ΔT ≈ 19°C) салыштырмалуу байкалган жогорку температуранын жогорулашы EPR эффектинин эсебинен шишик ткандарында жакшы өткөрүмдүүлүккө жана топтолушуна байланыштуу болушу мүмкүн.
MDA-MB-231 шишиктери бар чычкандардын инфракызыл термикалык сүрөттөрү инъекциядан кийин 8 сааттан кийин ар кандай убакытта 808 нм лазер менен нурланган.Ар бир топтун төрт биологиялык кайталоонун репрезентативдик сүрөттөрү көрсөтүлгөн.B Салыштырмалуу шишик көлөмү жана C дарылоо учурунда чычкандардын ар кандай топторунун орточо шишик массасы.D Чычкандардын ар кандай топторунун дене салмагынын ийри сызыктары.0,5 Вт/см2 кубаттуулуктагы толкун узундугу 808 нм лазер менен 10 мүнөт (300 Дж/см2) нурлантуу.Ката тилкелери, орточо ± стандарттык четтөө (n = 3). Жупташтырылбаган, эки тараптуу t тесттери *p <0.05, **p <0.01 жана ***p <0.001. Жупташтырылбаган, эки тараптуу t тесттери *p <0.05, **p <0.01 жана ***p <0.001. Непарные двусторонние t-критерии *p <0,05, **p <0,01 и ***p <0,001. Жупташкан эки куйруктуу t-тесттер *p<0.05, **p<0.01 жана ***p<0.001.未配对的双边t 检验*p <0,05、**p <0,01 和***p <0,001。未配对的双边t 检验*p <0,05、**p <0,01 和***p <0,001。 Непарные двусторонние t-тесты *p <0,05, **p <0,01 и ***p <0,001. Жупташкан эки куйруктуу t-тесттер *p<0.05, **p<0.01 жана ***p<0.001. E H&E ар кандай дарылоо топторундагы негизги органдардын жана шишиктердин сүрөттөрүн боёо, анын ичинде туздуу, туздуу + лазер, RuDA, RuDA + лазер, RuDA-NPs жана RuDA-NPs + лазер топтору. E H&E ар кандай дарылоо топторундагы негизги органдардын жана шишиктердин сүрөттөрүн боёо, анын ичинде туздуу, туздуу + лазер, RuDA, RuDA + лазер, RuDA-NPs жана RuDA-NPs + лазер топтору. Изображения окрашивания E H&E негизги органдары жана опухолей из разных группа лечения, включая группы физиологического раствора, физиологиялык раствора + лазера, RuDA, RuDA + Laser, RuDA-NPs жана RuDA-NPs + Laser. E H&E ар кандай дарылоо топторундагы негизги органдардын жана шишиктердин сүрөттөрүн боёо, анын ичинде туздуу, туздуу + лазер, RuDA, RuDA + Laser, RuDA-NPs жана RuDA-NPs + Laser топтору.来自 不同 治疗 组 的 е h 器官 和 肿瘤 е е h 器官 和 肿瘤 肿瘤 的 h 盐水 染色 肿瘤 + 激光, руда, руда + 激光, руда-NPS 和 Руда-NPS + 激光组.来自不同治疗组的主要器官和肿瘤的E H&E Окрашивание E H&E негизги органдары жана опухолей из различных группа лечения, включая физиологический раствор, физиологический раствор + лазер, RuDA, RuDA + лазер, RuDA-NPs жана RuDA-NPs + лазер. E H&E негизги органдардын жана шишиктердин ар кандай дарылоо топторунун, анын ичинде туздуу, туздуу + лазер, RuDA, RuDA + лазер, RuDA-NPs жана RuDA-NPs + лазер менен боёо.Масштаб тилкеси: 60 мкм.
RuDA жана RuDA NPs менен in vivo фототерапиянын эффектиси бааланды, мында MDA-MB-231 шишиктери бар жылаңач чычкандарга куйрук тамыры аркылуу 10,0 мкмоль кг-1 бир дозада RuDA же RuDA NPs инъекциясы, андан кийин 8 инъекциядан кийин саат.толкун узундугу 808 нм болгон лазердик нурлануу.Figure 8B көрсөтүлгөндөй, шишик көлөмү туздуу жана лазердик топтордо олуттуу көбөйгөн, туздуу же лазер 808 нурлануу шишик өсүшүнө аз таасир эткенин көрсөтүп турат.Туздуу топко окшоп, шишиктин тез өсүшү RuDA-NPs же RuDA менен дарыланган чычкандарда лазердик нурлануунун жоктугунан байкалган, бул алардын аз караңгы уулуулугун көрсөткөн.Ал эми, лазердик нурлануудан кийин, RuDA-NP жана RuDA менен дарылоо да туздуу топко салыштырмалуу шишик көлөмүнүн 95,2% жана 84,3% кыскарышы менен шишиктин олуттуу регрессиясын жаратты, бул эң сонун синергетикалык PDTди көрсөтөт., RuDA/CHTV эффектиси аркылуу.– NP же Руда. RuDA менен салыштырганда, RuDA NPs жакшыраак фототерапевттик эффект көрсөттү, бул негизинен RuDA NPs EPR эффектиси менен шартталган.Шишиктин өсүшүн токтотуунун натыйжалары андан ары дарылоонун 15-күнүндө кесилген шишиктин салмагы менен бааланган (сүрөт 8C жана кошумча 33-сүрөт).RuDA-NP менен дарыланган чычкандарда жана RuDA менен дарыланган чычкандарда орточо шишик массасы 0,08 жана 0,27 г болгон, бул контролдук топко (1,43 г) караганда бир топ жеңил болгон.
Мындан тышкары, чычкандардын дене салмагы RuDA-NPs же RuDA in vivo кара уулуулугун изилдөө үчүн ар бир үч күн жазылган.Figure 8D көрсөтүлгөндөй, дене салмагынын эч кандай олуттуу айырмачылыктар бардык дарылоо топтор үчүн байкалган. Андан тышкары, ар кандай дарылоо топторунан негизги органдардын (жүрөк, боор, көк боор, өпкө жана бөйрөк) гематоксилин жана эозин (H&E) боёгу жүргүзүлдү. Андан тышкары, ар кандай дарылоо топторунан негизги органдардын (жүрөк, боор, көк боор, өпкө жана бөйрөк) гематоксилин жана эозин (H&E) боёосу аткарылган. Кроме того, было проведено окрашивание гематоксилином жана эозином (H&E) негизги органдардын (сердца, печени, селезенки, легких и почек) из разных группа лечения. Мындан тышкары, ар кандай дарылоо топторунун негизги органдарынын (жүрөк, боор, көк боор, өпкө жана бөйрөк) гематоксилин жана эозин (H&E) боёосу аткарылган.此外，对不同治疗组的主要器官（心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏）肺和肾脏）进行H(E) (H&E) Кроме того, проводили окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) негизги органдар (сердца, печени, селезенки, легких и почек) в различных группах лечения. Мындан тышкары, ар кандай дарылоо топторунда негизги органдардын (жүрөк, боор, көк боор, өпкө жана бөйрөк) гематоксилин жана эозин (H&E) боёгу жүргүзүлгөн.Сүрөттө көрсөтүлгөндөй.8E, RuDA-NPs жана RuDA топторунун беш негизги органынын H&E боёгон сүрөттөрү эч кандай айкын аномалияларды же органга зыян келтирбейт. 8E, RuDA-NPs жана RuDA топторунун беш негизги органынын H&E боёгон сүрөттөрү эч кандай айкын аномалияларды же органга зыян келтирбейт.Сүрөттө көрсөтүлгөндөй.8E, изображения окрашивания H&E пяти негизги органдарынан RuDA-NPs и RuDA не демонстрируются не демонстрируются явных аномалия же повреждений органдар. 8E, RuDA-NPs жана RuDA топторунун беш негизги органынын H&E боёгон сүрөттөрү эч кандай айкын орган аномалияларын же жабыркоолорду көрсөтөт.如图8E 所示,来自RuDA-NPs如图8E 所示，来自RuDA-NPs 和RuDA 组的五个主要器官的H&E Как показано на рисунке 8E, изображения окрашивания H&E пяти негизги органдарынан RuDA-NPs жана RuDA не показали явных аномалия же повреждения органдары. Сүрөт 8E көрсөтүлгөндөй, RuDA-NPs жана RuDA топторунун беш негизги органдарынын H & E боёгон сүрөттөр эч кандай айкын аномалияларды же орган зыян көрсөттү.Бул жыйынтыктар RuDA-NP да, RuDA да in vivo уулуулугунун белгилерин көрсөткөн эмес. Мындан тышкары, шишиктердин H&E боёгон сүрөттөрү RuDA + Laser жана RuDA-NPs + Laser топтору тең рак клеткаларынын катуу кыйроосуна алып келиши мүмкүн экенин көрсөттү, RuDA жана RuDA-NPs фототерапевтикалык эффективдүүлүгүн көрсөткөн. Мындан тышкары, шишиктердин H&E боёгон сүрөттөрү RuDA + Laser жана RuDA-NPs + Laser топтору тең рак клеткаларынын катуу кыйроосуна алып келиши мүмкүн экенин көрсөттү, RuDA жана RuDA-NPs фототерапевтикалык эффективдүүлүгүн көрсөткөн.Мындан тышкары, гематоксилин-эозин менен боёлгон шишик сүрөттөрү RuDA+Laser жана RuDA-NPs+Laser топтору рак клеткаларынын катуу кыйроосуна алып келиши мүмкүн экенин көрсөттү, бул RuDA жана RuDA-NPs in vivo жогорку фототерапевттик эффективдүүлүгүн көрсөтүп турат.此外, 肿瘤 的 H & E 染色 图像 显示, Руда + Лазер 和 Руда-NPS + Лазер 组均 可 证明 了 了 了 了了 RUDA-NPS 的 优异 的 体内 光疗光疗.此外, 肿瘤肿瘤 & E 染色染色, Руда + Лазер 和 Руда-NPS + Лазер 组均 证明 了 了 了 了 了 和 和 的 的 体内 光疗 ............. 。...Мындан тышкары, гематоксилин жана эозин менен боёлгон шишик сүрөттөрү RuDA+Laser жана RuDA-NPs+Laser топторунун экөө тең рак клеткаларынын катуу бузулушуна алып келгенин, RuDA жана RuDA-NPs in vivo жогорку фототерапевттик эффективдүүлүгүн көрсөттү.
Жыйынтыктап айтканда, DA тибиндеги лиганддар менен Ru(II)-arene (RuDA) органометалл комплекси агрегаттык ыкманы колдонуу менен ISC процессин жеңилдетүү үчүн иштелип чыккан.Синтезделген RuDA коваленттүү эмес өз ара аракеттенүү аркылуу RuDAдан алынган супрамолекулярдык системаларды түзө алат, ошону менен 1O2 түзүлүшүнө жана жарыктан келип чыккан рак терапиясы үчүн эффективдүү фототермикалык конверсияга көмөктөшөт.Белгилей кетчү нерсе, мономердик RuDA 808 нм лазердик нурланууда 1O2 түзбөй, бирок агрегаттык абалында 1О2 көп сандагы генерациялап, биздин долбоорлоонун сарамжалдуулугун жана натыйжалуулугун көрсөттү.Кийинки изилдөөлөр көрсөткөндөй, супрамолекулярдык ассамблея RuDAга жакшыртылган фотофизикалык жана фотохимиялык касиеттерге ээ, мисалы, PDT жана PTT иштетүү үчүн эң керектүү болгон кызылга сиңирүүчү жана фотобелгилүү каршылык.In vitro жана in vivo эксперименттери жакшы био шайкештиги жана шишикте жакшы топтолушу менен RuDA NPs 808 нм толкун узундугунда лазердик нурлануу учурунда эң сонун жарыктан келип чыккан антиракка каршы активдүүлүгүн көрсөттү.Ошентип, RuDA NPs эффективдүү бимодалдык супрамолекулярдык PDT/PTW реагенттери катары 800 нмден жогору толкун узундуктарында активдештирилген фотосенсибилизаторлордун топтомун байытат.Супрамолекулярдык системанын концептуалдык дизайны эң сонун фотосенсибилизациялоочу эффекттери менен NIR активдештирилген фотосенсибилизаторлор үчүн эффективдүү жолду камсыз кылат.
Бардык химиялык заттар жана эриткичтер коммерциялык жеткирүүчүлөрдөн алынган жана андан ары тазалоосуз колдонулган.RuCl3 Boren Precious Metals Co., Ltd. компаниясынан (Кунмин, Кытай) сатылып алынган.[(η6-p-cym)Ru(fendio)Cl]Cl (фендио = 1,10-фенантролин-5,6-дион) жана 4,7-бис[4-(N,N-дифениламино)фенил]-5 ,6-Diamino-2,1,3-benzothiadiazole мурунку изилдөөлөр64,65 ылайык синтезделген.ЯМР спектрлери эриткич катары d6-DMSO же CDCl3 колдонуу менен Түштүк-Чыгыш университетинин аналитикалык сыноо борборунда Bruker Avance III-HD 600 MHz спектрометринде жазылган.Химиялык жылыштар δ промилле менен берилген.тетраметилсиланга карата жана J өз ара аракеттенүү константалары герцте абсолюттук маанилерде берилген.Жогорку резолюциядагы масс-спектрометрия (HRMS) Agilent 6224 ESI/TOF MS аспабында аткарылган.C, H жана N элементтеринин анализи Vario MICROCHNOS элементардык анализаторунда (Elementar) аткарылган.УК-көрүнүүчү спектрлер Shimadzu UV3600 спектрофотометринде өлчөнгөн.Флуоресценция спектрлери Shimadzu RF-6000 спектрофлюориметринде жазылган.EPR спектрлери Bruker EMXmicro-6/1 приборунда жазылган.Даярдалган үлгүлөрдүн морфологиясы жана структурасы 200 кВ чыңалууда иштеген FEI Tecnai G20 (TEM) жана Bruker Icon (AFM) аспаптарында изилденген.Динамикалык жарык чачыратуу (DLS) Nanobrook Omni анализаторунда (Brookhaven) аткарылган.Фотоэлектрохимиялык касиеттери электрохимиялык түзүлүштө өлчөнгөн (CHI-660, Кытай).Фотоакустикалык сүрөттөр FUJIFILM VisualSonics Vevo® LAZR тутумун колдонуу менен алынган.Конфокалдык сүрөттөр Olympus FV3000 конфокалдык микроскоптун жардамы менен алынган.FACS анализи BD Calibur агымынын цитометринде жүргүзүлгөн.Жогорку натыйжалуу суюк хроматография (HPLC) эксперименттери Waters Alliance e2695 системасында 2489 UV/Vis детекторун колдонуу менен аткарылган.Гель өтүү хроматографиясы (GPC) сыноолору Thermo ULTIMATE 3000 аспабында ERC RefratoMax520 сынуу көрсөткүчүнүн детекторун колдонуу менен жазылган.
[(η6-p-cym)Ru(fendio)Cl]Cl (фендио = 1,10-фенантролин-5,6-дион)64 (481,0 мг, 1,0 ммоль), 4,7-бис[4 -(N, N-дифениламино)фенил]-5,6-диамино-2,1,3-бензотиадиазол 65 (652,0 мг, 1,0 ммоль) жана мөңгү уксус кислотасы (30 мл) рефлюкс муздаткычында 12 саатка аралаштырылды.Андан кийин эриткич вакуумда айлануучу бууланткычтын жардамы менен алынып салынды.Алынган калдык флеш колонна хроматографиясы (силикагель, CH2Cl2:MeOH=20:1) аркылуу тазаланып, RuDA жашыл порошок түрүндө алынды (чыгарылышы: 877,5 мг, 80%).анус.C64H48Cl2N8RuS үчүн эсептелген: C 67.84, H 4.27, N 9.89.Табылган: С 67.92, Н 4.26, N 9.82.1H ЯМР (600 МГц, d6-DMSO) δ 10,04 (с, 2Н), 8,98 (с, 2Н), 8,15 (с, 2Н), 7,79 (с, 4Н), 7,44 (с, 8Н), 7,21 (д, J = 31,2 Гц, 16Н), 6,47 (с, 2Н), 6,24 (с, 2Н), 2,69 (с, 1Н), 2 ,25 (с, 3Н), 0,99 (с, 6Н).13C NMR (150 MHz, D6-DMSO), δ (PPM) 158.03, 152.81, 147,16, 139.98, 136.21, 135.9, 134,68, 128,68, 128.02, 128.68, 128.01, 125.68, 124,45, 103.41, 103.45, 103.41, , 103., 86,52, 84,75, 63,29, 30,90, 22,29, 18,83.ESI-MS: m/z [M-Cl]+ = 1097,25.
4,7-бис[4-(N,N-диэтиламино)фенил-5,6-диамино-2,1,3-бензотиадиазолдун (L2) синтези: L2 эки баскычта синтезделди.Pd(PPh3)4 (46 мг, 0,040 ммоль) N,N-диэтил-4-(трибутилстанил)анилинге (1,05 г, 2,4 ммоль) жана 4,7-дибромо-5,6-динитро эритмесине кошулду - 2, 1,3-бензотиадиазол (0,38 г, 1,0 ммоль) кургак толуолдо (100 мл).Аралашма 100°С температурада 24 саат бою аралаштырылды.Толуолду вакуумда алып салгандан кийин пайда болгон катуу зат нефть эфири менен жуулган.Андан кийин бул кошулма (234,0 мг, 0,45 ммоль) менен темир порошоктун (0,30 г, 5,4 ммоль) уксус кислотасындагы (20 мл) аралашмасы 80°С температурада 4 саат бою аралаштырылды.Реакция аралашмасы сууга куюлган жана алынган күрөң катуу зат чыпкалоо жолу менен чогултулган.продукт жашыл катуу (126,2 мг, 57% киреше) алуу үчүн вакуумдук сублимация менен эки жолу тазаланган.анус.C26H32N6S үчүн эсептелген: C 67.79, H 7.00, N 18.24.Табылган: С 67.84, Н 6.95, Н 18.16.1Н ЯМР (600 МГц, CDCl3), δ (ppm) 7.42 (d, 4H), 6.84 (d, 4H), 4.09 (s, 4H), 3.42 (d, 8H), 1.22 (s, 12H).13С ЯМР (150 МГц, CDCl3), δ (ppm) 151,77, 147,39, 138,07, 131,20, 121,09, 113,84, 111,90, 44,34, 12,77.ESI-MS: m/z [M+H]+ = 461,24.
Кошулмалар даярдалган жана RuDAга окшош процедуралардан кийин тазаланган.анус.C48H48Cl2N8RuS үчүн эсептелген: C 61.27, H 5.14, N 11.91.Табылды: C, 61.32, H, 5.12, N, 11.81,1H NMR (600 MHz, d6-DMSO), δ (ppm) 10.19 (s, 2H), 9.28 (s, 2H), 8.09 (s, 2H), 7,95 (с, 4Н), 6,93 (с, 4Н), 6,48 (к, 2Н), 6,34 (с, 2Н) ​​, 3,54 (т, 8Н), 2,80 (м, 1Н), 2,33 (с, 3Н), 1,31 (t, 12H), 1.07 (s, 6H).13C NMR (151 MHz, CDCL3),, 38.06, 31.22, 29.69, 22.29, 19.19, 14.98, 12.93.ESI-MS: m/z [M-Cl]+ = 905,24.
RuDA MeOH/H2O (5/95, v/v) 10 мкМ концентрациясында эриген.RuDAнын абсорбциялык спектри ар бир 5 мүнөт сайын Shimadzu UV-3600 спектрофотометринде толкун узундугу 808 нм (0,5 Вт/см2) болгон лазер нуру менен нурлануу астында өлчөнгөн.ICG спектрлери стандарт менен бирдей шарттарда жазылган.
EPR спектрлери микротолкундуу кубаттуулугу 20 мВт, сканерлөө диапазону 100 Г жана талаа модуляциясы 1 Г. 2,2,6,6-тетраметил-4-пиперидон менен Bruker EMXmicro-6/1 спектрометринде жазылган. (TEMP) жана 5,5-диметил-1-пирролин N-оксиди (DMPO) айланма тузак катары колдонулган.Толкун узундугу 808 нм (0,5 Вт/см2) болгон лазердик нурлануунун таасири астында RuDA (50 мкМ) жана TEMF (20 мМ) же DMPO (20 мМ) аралаш эритмелери үчүн электрондук спиндик-резонанстык спектрлер жазылган.
RuDA үчүн DFT жана TD-DFT эсептөөлөрү PBE1PBE/6–31 G*//LanL2DZ деңгээлдеринде Гаусс программасын 1666,67,68 колдонуу менен суу эритмесинде жүргүзүлгөн.HOMO-LUMO, тешик жана электрондордун бөлүштүрүлүшү аз энергиялуу синглет дүүлүктүрүлгөн RuDA абалын GaussView программасынын (5.0 версиясы) жардамы менен түзүлгөн.
Биз алгач стандарт катары ICG (ΦΔ = 0,002) менен кадимки UV-көрүнүүчү спектроскопияны колдонуу менен 1O2 RuDA генерациясынын натыйжалуулугун өлчөөгө аракет кылдык, бирок ICGнин фотодеградациясы натыйжаларга катуу таасир этти.Ошентип, 808 нм (0,5 Вт/см2) толкун узундугундагы лазер менен нурланганда 428 нмге жакын ADA флуоресценциясынын интенсивдүүлүгүнүн өзгөрүшүн аныктоо менен 1O2 RuDAнын кванттык чыгышы өлчөнгөн.Тажрыйбалар RuDA жана RuDA NPs (20 мкМ) АКШда (50 мкм) камтыган суу/DMF (98/2, v/v) менен аткарылган.1O2 кванттык кирешелүүлүгү төмөнкү формула боюнча эсептелген: ΦΔ (PS) = ΦΔ (ICG) × (rFS/APS)/(rICG/AICG).rPS жана rICG - тиешелүүлүгүнө жараша фотосенсибилизатордон жана ICGден алынган 1O2 менен ADAнын реакция ылдамдыгы.APS жана AICG тиешелүүлүгүнө жараша 808 нмдеги фотосенсибилизатордун жана ICGдин абсорбенти болуп саналат.
AFM өлчөөлөрү суюк шарттарда Bruker Dimension Icon AFM системасында сканерлөө режимин колдонуу менен жүргүзүлгөн.Суюк клеткалар менен ачык структураны колдонуу менен, клеткалар этанол менен эки жолу жууп, азот агымы менен кургатылган.Кургатылган клеткаларды микроскоптун оптикалык башына салыңыз.Дароо суюктуктун көлмөгүнө үлгүнүн бир тамчысын салыңыз жана стерилдүү бир жолу колдонулуучу пластик шприц менен стерилдүү ийнени колдонуп, аны консолдун үстүнө коюңуз.Дагы бир тамчы түздөн-түз үлгүгө коюлат жана оптикалык башты түшүргөндө, эки тамчы биригип, үлгү менен суюк резервуардын ортосунда менискты түзөт.AFM өлчөөлөрү SCANASYST-FLUID V түрүндөгү нитриддик консолду колдонуу менен жүргүзүлдү (Брукер, катуулук k = 0,7 N m-1, f0 = 120-180 кГц).
HPLC хроматограммалары 2489 UV/Vis детекторунун жардамы менен Phoenix C18 мамычасы (250×4,6 мм, 5 мкм) менен жабдылган Waters e2695 системасында алынган.Детектордун толкун узундугу 650 нм.Мобилдик фазалар А жана В тиешелүүлүгүнө жараша суу жана метанол болгон жана кыймылдуу фаза агымынын ылдамдыгы 1,0 мл · мин-1 болгон.Градиент (эритүүчү В) төмөнкүдөй болгон: 0дөн 4 мүнөткө чейин 100%, 5 мүнөттөн 30 мүнөткө чейин 100% дан 50%ке чейин жана 31ден 40 мүнөткө чейин 100% га кайтарылган.Руда 50 мкм концентрацияда метанол менен суунун аралаш эритмесинде (көлөмү боюнча 50/50) эриди.Инъекциянын көлөмү 20 мкл болгон.
GPC анализдери эки PL aquagel-OH MIXED-H мамычалары (2×300×7,5 мм, 8 мкм) жана ERC RefratoMax520 сынуу көрсөткүчүнүн детектору менен жабдылган Thermo ULTIMATE 3000 аспабында жазылган.GPC колоннасы 30°С 1 мл/мин агымы менен суу менен элюталанган.Руда NPs PBS эритмесинде эриген (рН = 7,4, 50 мкм), сайынуу көлөмү 20 мкл болгон.
Фототоктор электрохимиялык түзүлүштө өлчөнгөн (CHI-660B, Кытай).Лазерди күйгүзгөндө жана өчүргөндө оптоэлектрондук жооптор (808 нм, 0,5 Вт/см2) кара кутуда 0,5 В чыңалууда өлчөнгөн.Стандарттык үч электроддук клетка жумушчу электрод катары L түрүндөгү айнектей көмүртек электрод (GCE), эталондук электрод катары стандарттык каломель электрод (SCE) жана каршы электрод катары платина диски менен колдонулган.Электролит катары 0,1 М Na2SO4 эритмеси колдонулган.
Адамдын эмчек рагы клеткасынын MDA-MB-231 линиясы KeyGEN Biotec Co., LTD (Нанкин, Кытай, каталог номери: KG033) компаниясынан сатылып алынган.Клеткалар 10% түйүлдүктүн сары суунун (FBS), пенициллиндин (100 мкг/мл) жана стрептомициндин (100 мкг/мл) эритмеси менен толукталган Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM, жогорку глюкоза) менен моно катмарларда өстүрүлдү.Бардык клеткалар 5% СО2 камтыган нымдуу атмосферада 37°Cде өстүрүлгөн.
MTT анализи Vc (0,5 мМ) менен же болбосо жарык нурлануунун бар жана жок болгон шартында RuDA жана RuDA-NPs цитотоксичтүүлүгүн аныктоо үчүн колдонулган.MDA-MB-231 рак клеткалары болжол менен 1 x 105 клетка/мл/клетка тыгыздыгында 96 уячалуу пластинкаларда өстүрүлгөн жана 37,0°C температурада 5% CO2 жана 95% аба атмосферасында 12 саат бою инкубацияланган.Клеткаларга сууда эриген RuDA жана RuDA NP кошулган.12 сааттык инкубациядан кийин клеткалар 10 мүнөткө (300 Дж см -2) 808 нм толкун узундугунда 0,5 Вт см -2 лазердик нурланууга дуушар болгон жана андан кийин 24 саат бою караңгы жерде инкубацияланган.Андан кийин клеткалар MTT (5 мг/мл) менен дагы 5 саатка инкубацияланган.Акырында, пайда болгон кызгылт көк формазан кристаллдарын эритүү үчүн чөйрөнү DMSO (200 мкл) кылып өзгөртүңүз.OD маанилери 570/630 нм толкун узундугу менен микропластинаны окугучтун жардамы менен ченелген.Ар бир үлгү үчүн IC50 мааниси жок дегенде үч көз карандысыз эксперименттен алынган доза-жооп ийри сызыктарынан SPSS программасын колдонуу менен эсептелген.
MDA-MB-231 клеткалары 50 мкм концентрацияда RuDA жана RuDA-NP менен мамиле кылышкан.12 сааттык инкубациядан кийин клеткалар 10 мүнөткө (300 Дж/см2) толкун узундугу 808 нм жана кубаттуулугу 0,5 Вт/см2 болгон лазер менен нурланды.Витамин С (Vc) тобундагы клеткалар лазердик нурлануунун алдында 0,5 мМ Vc менен дарыланган.Андан кийин клеткалар караңгыда кошумча 24 саат инкубацияланган, андан кийин AM calcein жана пропидий йодид (20 мкг/мл, 5 мкл) менен 30 мүнөткө боёлуп, андан кийин PBS (10 мкл, pH 7,4) менен жуушкан.боёлгон клеткалардын сүрөттөрү.